淋病是我国性传播疾病的主要病种,越来越引起人们的广泛关注,淋球菌是淋病的病原菌。淋病 治疗过程中抗生素的滥用以及用药的不规范,产生了新耐药菌株和新的耐药谱,给临床治疗带来了困难。本文对2005年4月至2006年4月深圳地区的淋球菌营养型和耐药性进行研究,现将研究结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株来源
实验菌株均从我区门诊患者的泌尿生殖道分泌物中分离,所有菌株经革兰染色、氧化酶试验和糖发酵试验证实为淋球菌后传代一次,洗于脱脂牛奶中,于-78℃低温冰箱冻存备用。
1.1.2 抗生素
大观霉素由美国UpJohn公司生产,头孢曲松为瑞士Roche公司生产,四环素、青霉素、环丙沙星由澳大利亚威尔士亲王医院 Tapsall博士提供。
1.1.3 培养基
@A基础培养基(OXOID)公司生产加入脱纤维新鲜羊血。
1.1.4 标准菌株
WHO A、B、C、D、E标准淋球菌菌株及营养型的CDC标准菌株由中国医学科学院皮肤病研究所提供。
1.2 方法
1.2.1 最低抑菌浓度(MIC)测定 采用WHO西太区淋球菌耐药监测规划推荐的琼脂稀释法。即先将4种抗生素按要求配成原液,再倍比稀释成不同的浓度。将3.7%GC基础琼脂高压灭菌,水浴冷却至50℃,加入脱纤维新鲜羊血 (终浓度10%)。取0.1 ml倍比稀释好的4种抗生素工作液,加入10 ml血液基础培养基,混匀后倾倒平板,从低浓度至高浓度配制各种浓度的平板,实验菌株和标准菌株用18 h~24 h的淋球菌菌苔,制成10 cfu/ml的菌悬液,用多头接种器将菌悬液接种于各种浓度的平板,置36℃、5%CO2环境下培养,36 h后观察结果,记录无菌落生长的最低抑菌浓度。以WHO A、B、C、D、E标准菌株作质控。
1.2.2 β内酰胺酶测定
采用纸片碘量法测定菌株的β内酰胺酶,即取一试管,加入2滴100 000 U/ml的青霉素溶液,2滴1%淀粉溶液,1滴碘试剂,呈蓝色混合物,在一滤纸条上滴一滴试剂,将一接种环培养物涂在蓝点上,放置1 min~2 min,如蓝色变成无色即为β内酰胺酶阳性菌株,颜色无变化则为阴性。每次试验以WHO E株作阳性对照,A株作阴性对照。
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