【摘要】 目的：了解女性生殖道中生殖支原体(Mg)的感染情况。方法：用套式聚合酶链反应技术(nPCR)对女性生殖道分泌物211例、组织231例进行Mg 16 SrRNA基因片段检测及核苷酸序列分析。结果：生殖道炎症组（组织24/67例，分泌物59/173例）的检出率均显著高于非炎症组（组织6/164例，分泌物2/38例）P＜0.000 01；在卵巢、输卵管、子宫组织中，宫颈炎（6/30）和宫颈炎性息肉（18/37）的检出率与非炎性组织比较P＜0.05；在各种阴道炎（57/153）中，淋菌性（16/63）、霉菌性（24/52）、滴虫性（13/29）阴道炎检出率与正常人（1/38）比较，差异有显著性，P＜0.000 1；对5例Mg阳性标本的16S rRNA基因片段一级结构序列分析，发现与国际标准株Mg 37同源性达97.8%，有一个T碱基插入。结论：Mg的感染与女性生殖道炎症密切相关。
【关键词】 套式PCR；生殖支原体；生殖道炎症；DNA测序
The Prevalence and Signifance of Expression and Nucleotide Sequence of Mycoplasma Gentalium among Female Patients with Reproductive Tract Infectious Diseases
LI Lu, YANG Shulan，MOU Qinfeng
The Third Affiliated Hospital of Suzhou Univesity，Changzhou, Jiangsu 213003, China
Abstract： Objective To find out the prevalence of mycoplasma gentalium(Mg) infection among female reproductive tract infectious diseases. Methods The nested polymerase chain reaction technique and nucleotide sequence analysis targeting the 16SrRNA gene for detecting mycoplasma infection in 211 secretion samples and 231 tissue samples from female reproductive tract infectious disease patients. Results The positive rates of the 16SrRNA gene among patients with reproductive tract infectious diseases are much higher than those among noneinfectous disease patients；The positive rate of 16SrRNA gene among patients with cervicitis and cervices inflammatory polyp is much higher than the other inflammatory reproductive tract deseases. The 16SrRNA gene load among gonorrheal viginitis, trichomonal viginitis and candidly viginitis are much higher than control group respectively. Conclusion Mycoplasma gentalium is closely correlated to the female reproductive tract infectious diseases；The analysis of primary structure of 16 SrRNA revealed that the homology was 97.8% compared with the international standard Mg37 strain, only besides a T insertion.
Key words： nPCR； Mycoplasma gentalium； Female reproductive tract infectious diseases； Nucleotide sequence
生殖支原体（Mycoplasma genitalium， Mg）是在人类中发现的第12种支原体，并已证明与人类的男女性泌尿生殖道炎性疾病相关［1］。以往的研究主要集中在对生殖道分泌物进行检测，但对相关组织进行检测的报道较少，为此我们将这两者结合起来，采用简便、敏感、特异的套式PCR法［2］，检测了女性生殖道分泌物（211例）和组织（231例）中Mg 16 SrRNA基因的表达情况，进一步探讨Mg的感染与女性生殖道炎症的关系。现报告如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象
1.1.1 正常对照组
非炎性病例202例，均经临床及实验室诊断排除淋菌、解脲支原体、沙眼衣原体、宫颈炎及宫颈炎性息肉。 其中：分泌物标本38例，本院门诊体检健康女性，年龄22岁~55岁，平均年龄33.5岁；组织标本164例，其中卵巢巧克力囊肿20例，卵巢畸胎瘤20例，黄体破裂出血20例，输卵管妊娠46例，子宫平滑肌瘤20例，子宫内膜增生过长38例。年龄18岁~46岁，平均年龄34岁。
1.1.2 炎症组
炎性分泌物173例，其中淋菌性阴道炎43例，霉菌性阴道炎52例，滴虫性阴道炎29例，其他阴道炎29例，盆腔炎20例,均为本院妇科门诊患者，经临床和实验室诊断为生殖道炎症,年龄18岁~45岁，平均年龄31.5岁；组织炎性标本67例，经病理诊断为宫颈炎30例和宫颈炎性息肉37例，年龄18岁~48岁，平均年龄33岁。
1.2 方法
1.2.1 生殖道分泌物标本的采集
用无菌棉拭子采集宫颈分泌物，置1.5 ml Eppendorf管中，加入50 μl裂解液，2 μl蛋白酶K，置55℃水浴1 h。
1.2.2 生殖道组织标本采集处理
用石蜡包埋的组织2片~3片（每片约5 μm厚）。置1.5 ml Eppendorf管中，加入1 ml STE缓冲液（0.5%SDS+10 mmol/L Tris HCl+1 mmol/L EDTA，pH 7.8）置72℃水浴10 min，插入无菌滤纸条吸掉浮面的石蜡，用加样器吸弃剩余STE液，重复上述过程3次，再4 000 rpm离心5 min，吸弃上清STE液。加裂解液100 μl，蛋白酶K 4 μl置37℃过夜。
1.2.3 DNA模版的制备
将经上述处理后的标本置95℃以上水浴10 min，再15 000 rpm离心5 min，上清液即为DNA扩增模版。
1.2.4 套式PCR扩增
以Mg的16S rRNA基因为靶基因，套式PCR参数、灵敏度、特异性试验参见文献［7］，试剂由无锡市克隆技术研究所提供。严格按照操作说明书操作。
1.3 统计方法
采用SPSS 10.0进行χ2检验。
1.4 核苷酸序列测定
将PCR扩增后阳性产物交由中国科学院上海植物生理研究所国家重点实验室测定。Mg标准株由美国（National Center for Biotechnology Information ）提供，株名MgG37。
